每50～100mg 組織加入0.2體積 TRIzol

1.加鋼珠1顆,設置研磨儀參數：12單位振頻,1min,每種樣品基本充分勻漿

2. 將上述勻漿液每0.2體積 TRIzol 試劑用量的勻漿液中加入0.04體積氯仿,，蓋緊管蓋,，手動劇烈震搖15 秒鐘，然后室溫靜置2～3 分鐘,。

3. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘,。

4. 小心吸取上層水相（無色）加入到新試管中，同時計算所吸取的水相體積,。不必過多吸取,，防止吸入DNA和蛋白雜質（中間層，白色）,。

5. 加入所吸取水相等體積預冷的異丙醇,，蓋緊管蓋，輕輕搖勻,。

6. 室溫靜置10 分鐘，待RNA 充分沉淀（為減少RNA 降解,，此步驟可省略）,。

7. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。

8. 將上清棄除（注意別丟棄沉淀）,，每管加入0.2體積75%乙醇潤洗,，蓋緊管蓋，輕輕晃動試管,，以去除殘留的異丙醇和鹽份,。4℃ 7,500g 離心5 分鐘。

9. 將上清棄除（注意別丟棄沉淀）,，打開管蓋,，將RNA 沉淀干燥（室溫揮發(fā)或真空干燥）。注意RNA 沉淀不可完全干燥,，否則難以溶解,。

10. 將RNA 沉淀溶解于適量的無RNase 水中。如果RNA 沉淀溶解不完全,，將使OD260/OD280≤1.6,。此RNA 溶液可用于進一步實驗，或者-70℃保存。

實驗結果