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2019年12月以來,,新型冠狀肺炎疫情仍在肆虐。國(guó)家對(duì)新型冠狀肺炎以及相關(guān)的病媒生物威脅公共安全加大投入力度,,各地疾控中心也開始病媒生物研究篩選預(yù)防工作,。在我國(guó)法定報(bào)告的傳染病中有許多屬于病媒生物性傳染病,如鼠疫,、流行性出血熱,、鉤端螺旋體病、瘧疾,、登革熱,、地方性斑疹傷寒,、絲蟲病等;而一些消化道傳染病則通過病媒生物的機(jī)械性傳播在人群中擴(kuò)散,,如痢疾,、傷寒等。
病媒生物性傳染病是人類共同面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)之一,。通過對(duì)病媒生物的有效控制,,可以減少它們對(duì)人群的騷擾和經(jīng)濟(jì)損失,更可以預(yù)防和控制病媒生物性傳染病的發(fā)生和傳播,。加強(qiáng)病媒生物疾病預(yù)防控制已成為一個(gè)迫切的任務(wù),。安徽省疾病預(yù)防控制中心毒理科做病媒生物實(shí)驗(yàn)時(shí),就使用上海凈信冷凍研磨儀,。
實(shí)驗(yàn)背景:鼠類不僅傳播鼠疫,、流行性出血熱、鉤端螺旋體病,、斑疹傷寒等多種疾病,,嚴(yán)重危害人類健康;而 且通過嚙咬、盜食,、污染等方式給工業(yè),、農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)等造成直接或間接的經(jīng)濟(jì)損失。
一,、材料和方法:
樣品來源于居民區(qū)及收治醫(yī)院周 圍 環(huán) 境 采 集 目 標(biāo) 病 媒 生 物,。160份鼠肺樣品來自本地,15份蜚蠊體表擦拭子來自安徽等地,。所有樣品均凍存于-80攝氏度待檢,。
二、儀器及試劑:
1,、上海凈信冷凍研磨儀
2,、熒光定量PCR分析儀
3、高效病毒濃縮試劑盒
4,、巢式RT-PCR所采用的引物,一步法RT-PCR試劑盒
5,、RNA提取試劑盒
三、 實(shí)驗(yàn)方法
1,、樣品RNA的提取 別取待檢鼠肺組織于全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀充分再加入異硫酸氰胍溶液,,充分溶解后于-20℃保存,備蜚蠊體表擦拭子中加入無菌生理鹽水少許于4℃中過夜,,擠壓后取出棉拭子,,將剩余液體離心5min,其上清液則用高效病毒濃縮試劑盒進(jìn)行濃縮,,濃縮所得的晶體中再加入異硫酸氰胍溶液,,充分溶解后于-20℃保存?zhèn)溆?,按照試劑盒的說明 從樣品的異硫酸氰胍溶液中提取提取所得的RNA保存?zhèn)溆谩?/p>
樣品研磨前后
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、準(zhǔn)備全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀,。
2、金屬適配器,,以及鋼珠適配器,。
3、將老鼠組織剪碎,,放入研磨管,,加入鋼珠。
4,、將適配器裝入凈信研磨儀中,,開啟低溫功能保持溫度。
5,、設(shè)定參數(shù),,啟動(dòng)儀器至研磨程序結(jié)束,可得到如圖所示樣品,。
儀器介紹:
上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀是一種快速,、高效、制冷的研磨系統(tǒng),。它能在非常短的時(shí)間內(nèi)將土壤,、植物和動(dòng)物的組織/器官、細(xì)菌,、酵母,、真菌、孢子,、古生物標(biāo)本等樣品完成研磨,、粉碎、混合機(jī)細(xì)胞破壁,。廣泛應(yīng)用于生命科學(xué),、醫(yī)藥、生化,、環(huán)境,、地質(zhì)、農(nóng)業(yè),、林業(yè),、質(zhì)檢、材料等領(lǐng)域,。
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