上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司-專業(yè)多樣品組織研磨機(jī)研發(fā),，生產(chǎn)廠家,。
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地址：上海市松江區(qū)曹農(nóng)路5弄40號(hào)今天和大家分享一次超實(shí)用的宮頸組織樣品前處理過程!在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，樣本前處理直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，這次用到的冷凍研磨儀簡(jiǎn)直是 “神助攻”!
材料準(zhǔn)備清單：
冷凍研磨儀：實(shí)驗(yàn)的核心設(shè)備,，低溫環(huán)境能有效保護(hù)樣品生物活性
冷凍研磨儀 JXFSTPRP-CLN
Trizol：核酸提取的關(guān)鍵試劑，能高效裂解細(xì)胞
宮頸組織：本次實(shí)驗(yàn)的主角,，不同樣本特性決定處理方法
研磨珠,、研磨管：輔助研磨，幫助充分破碎組織
詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟：
儀器預(yù)冷：實(shí)驗(yàn)前將冷凍研磨儀預(yù)冷至 - 20℃,，這一步非常重要!低溫環(huán)境能最大限度保留樣品中的生物活性物質(zhì),，保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)的可靠性。
樣品預(yù)處理：由于宮頸組織中結(jié)締組織含量較高,，直接研磨效果不好,。我先用手術(shù)剪將樣品仔細(xì)剪碎，再放入 2ml 研磨管，加入適量研磨珠和核酸提取液 Trizol,，采用濕磨的方式進(jìn)行處理,。
設(shè)置研磨參數(shù)：把研磨儀頻率設(shè)為 60Hz，研磨時(shí)間 60 秒,。這個(gè)參數(shù)是我多次實(shí)驗(yàn)總結(jié)出來的,，能讓組織研磨得既充分又不會(huì)過度破壞樣本。
室溫靜置：研磨完成后,，將樣品在室溫(15℃-30℃)下放置 5 分鐘,，讓核酸蛋白復(fù)合物充分分離，為后續(xù)提取做準(zhǔn)備,。
加入氯仿萃?。好?1ml Trizol 對(duì)應(yīng)加入 0.2ml 氯仿，劇烈振蕩 15 秒后,，室溫靜置 3 分鐘,。這一步能有效分層，便于后續(xù)分離,。
低溫離心：最后在 4℃環(huán)境下進(jìn)行離心操作,，分離出上清液和沉淀物，上清液中就含有我們需要的核酸啦!
實(shí)驗(yàn)效果：
宮頸組織研磨前后效果對(duì)比圖
實(shí)驗(yàn)小貼士：
儀器配平：使用冷凍研磨儀和離心機(jī)時(shí),，一定要注意配平!否則不僅影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，還可能損壞儀器。
規(guī)范操作：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程最好在通風(fēng)柜中進(jìn)行,，Trizol 和氯仿都具有一定揮發(fā)性,，保護(hù)自己才能更好地做實(shí)驗(yàn)!
低溫保護(hù)：盡量全程保持低溫環(huán)境，防止樣品失活,，從預(yù)冷儀器到低溫離心,，每一步都不能馬虎!
希望這次的分享能給做相關(guān)實(shí)驗(yàn)的小伙伴帶來幫助～通過本次實(shí)驗(yàn)，清晰展現(xiàn)了冷凍研磨儀在宮頸組織樣品前處理中的高效與可靠,。從預(yù)冷準(zhǔn)備到參數(shù)設(shè)置,，每一個(gè)環(huán)節(jié)都至關(guān)重要。后續(xù)還將圍繞不同樣本特性及實(shí)驗(yàn)需求,，繼續(xù)探索冷凍研磨儀的更多應(yīng)用可能,，期待為大家?guī)砀鄬?shí)用的科研經(jīng)驗(yàn)分享!
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