實驗目的

對擬南芥或水稻穗進行研磨破碎，進而提取其DNA,。

實驗原理

通過研磨珠的撞擊,，充分擬南芥或水稻穗細胞，使其內(nèi)容物流出,，進而提取目標成分。

實驗材料和器具

樣品：擬南芥或水稻穗

儀器：全自動樣品冷凍研磨儀（上海凈信,，Tissuelyser-48）

耗材：離心管,，不銹鋼研磨珠（上海凈信）

試劑：TPS溶液（100mM Tris-Cl (pH 8.0),，10mM EDTA (pH 8.0)，1M KCl）

實驗步驟

1.取一片擬南芥的葉片（或10d左右的小苗）,，加入兩毫升EP管中,。

2.加鋼珠1顆

3.加TPS提取液0.02ml

4.設置研磨儀參數(shù)10單位頻振，1min,。（水稻嫩葉設置45S,，12單位頻振；老葉設置70S,，12單位頻振）

5.離心（4000rpm,，1min），將打碎的組織和提取液一起轉(zhuǎn)移至96孔板中,。

6.96孔板加蓋子,，75°加熱15min

7.大離心機高轉(zhuǎn)速10min

8.取上清,，轉(zhuǎn)入另一塊96孔板,，加入等體積的異丙醇。

9.加蓋子，混勻

10.4°下10min或-20°下10min,，如材料很多此步驟可省略,。

11.最高轉(zhuǎn)速離心10min。

12.棄上清,，加入0.04ml 70%乙醇,。

13.最高轉(zhuǎn)速離心10min

14.棄去乙醇，37°放置20-30min烘干

15.加入0.016ml水,，65°放置10min

16.離心除去氣泡,，之后可以直接用于PCR實驗。

實驗注意事項

1.-20°下該方法的DNA可以保存4個月以上,，4°大致可以放2-3周,。