（還可以提取如沉積物，排泄物,，廢水,，雪水等樣品的DNA）土壤微生物基因組DNA抽提試劑盒/提取試劑盒

（利用硅吸附DNA原理）

一,，說明

本試劑盒可以在30分鐘內(nèi)快速有效的直接從土壤分離微生物基因組DNA,。用上海凈信科技（全自動樣品快速勻漿機(jī)）FSTPRP儀器（將樣品與緩沖液加入帶有特殊小珠的樣品管/離心管）在40秒內(nèi)可以裂解土壤中的植物、動物組織,、細(xì)菌,、藻類、真菌孢子,、酵母,、線蟲,。經(jīng)過本試劑盒的分離純化，所得的DNA可以用于PCR,、限制性酶切,、電泳和其他使用。

濃縮SEWS-M使用前加入25ML無水乙醇,，并在瓶子上做好標(biāo)記,，蓋好瓶蓋

WASH D使用前加入56ML無水乙醇,，并在瓶子上做好標(biāo)記，蓋好瓶蓋

用1ML  ddH20（滅菌）完全溶解RNA酶,，將RNA酶放入水中煮,，水沸后再煮沸20分種，并掉炎,，緩慢冷至室溫后，將RNA酶取出,，全部加入 sodium phosphate buffer中,，充分混勻后，將sodium phosphate buffer buffer 放入4度保存。

試劑盒組成

二,，步驟

加入500MG 土壤樣品到一個(gè)樣品管中,，管中應(yīng)管有0.05-0.1ml  空間,。

（注意一，為使樣品盡可能遙多均勻,，一個(gè)樣品一般取四個(gè)管,，兩管并一管,，得到兩管的DNA，注意二,，在試驗(yàn)中,，可用普通離心管+氧化鋯珠（0.8g）,注意三，應(yīng)將放在-20度的樣品上一天取出化凍）

加入0.1956ml  sodium phosphate buffer 到樣品中

加入0.0244ml MT buffer 到樣品中

用上海凈信科技（全自動樣品快速研磨機(jī)機(jī)）儀器以速度14單位頻振60S 反復(fù)三次（確保完全可以粉碎）

13000rmp  離心5-10min ,，沉淀碎片    （注意一,，加一步去除腐酸的步驟：取上清到10研磨單位離心管,，加入。,。,。顛倒混勻，2MIN   12005MIN看不清）

將上清（約0.12ml）轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的2研磨單位離心管中,，加入0.05ml  PPS到管中，用手顛倒混勻10次,。

13000RPM 離心5MIN 以沉淀蛋白質(zhì),，轉(zhuǎn)移上清到一個(gè)干凈的2研磨單位離心管中（約0.14ml）

加入1ML Binding solution b（5倍體積）到2研磨單位離心管中，用手顛倒混勻2MIN (提前水加熱,，促進(jìn)DNA與硅膠給合)

將結(jié)全柱放入2ML收集管中,，凈混合液加入結(jié)合柱中,，室溫放置2 min.(分三次加，每次加0.12-0.14ml兩管并一管)

13000RPM離心1MIN,，倒掉收集管中的廢液,，將結(jié)合柱重新放入2研磨單位離心管中,。

加入0.1ml SEWS-M（Spin-buffer）到結(jié)合柱中，13000RPM離心1MIN,，倒掉收集管中的廢液。

注去注腐殖酸
 

在1.5研磨單位離心管中制備腐殖酸洗滌溶液：

Sodium phosphate buffer  978UL

MT  buffer            0.0244ml

Pps:                  250ul

混勻,，13000RPM離心1分種轉(zhuǎn)移上清液于一個(gè)干凈的2研磨單位離心管中,。

加入等體積的5M Guanidine Thiocyanate sojution 混勻。

加入0.1ml 腐殖酸洗滌液到步聚11中的結(jié)合術(shù)中,，13000RPM離心1分種,，倒掉收集管中廢液,。

重復(fù)上述步驟三次

接步驟十二

加入0.13mlwashD  于結(jié)合柱中，13000RPM離心1MIN,，倒掉收集管中的廢液。

將結(jié)合柱裝入離心管中,，130000RMP離心2MIN

將結(jié)合柱裝入1.5研磨單位離心管中,。室溫放置五分種，以便乙醇揮發(fā)干凈,，在膜中央小心加入，0.015ml DES  ,。不要戳破膜,，室溫放置2MIN。（37度  30MIN）

13000RPM離心1MIN 離心管中即為分離的DNA,，貯存于-20度或進(jìn)入下一步室實(shí)驗(yàn)。（應(yīng)將2管DNA混于一管,，混勻,，再分成兩管，這樣即能得到4管一管的目的,。目的是盡量消除樣品內(nèi)部差異）

本實(shí)驗(yàn)不用去除腐殖酸這一步,，但有文獻(xiàn)指出，在-20度時(shí),，腐殖酸仍會降解DNA，