實(shí)驗(yàn)步驟

1,、首先將上海凈信的組織研磨機(jī)上的制冷模塊預(yù)先置于-20℃,，使用時(shí)取出安裝好,。將研磨珠去RNA酶處理。

2,、隨機(jī)抽取小鼠的尾巴100µg,，把樣本剪成盡可能小段,，置于無RNA酶的2研磨單位離心管中（選擇耐液氮冷凍管子）,，同時(shí)加入1顆5號(hào)研磨珠和2顆3號(hào)研磨珠（如果選擇1.5研磨單位離心管,，只需要加入4-5顆3號(hào)研磨珠）。

3,、放置于液氮中一起浸泡3分鐘,，取出放置于預(yù)冷模塊中,，在全自動(dòng)樣品研磨儀上選擇13單位頻振研磨60s,。（該步驟可以根據(jù)研磨的細(xì)微程度要求可以再重復(fù)一遍）

4、把研磨好的樣本加入0.06ml的PBS0.14ml的RNAiso Plus（此處選擇PBS,，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入其他提取液,，如1ml TRIzol等）,，繼續(xù)置于研磨機(jī)上選擇13單位頻振研磨60s。樣本將處于糊狀,。（其他提取試劑有可能會(huì)出現(xiàn)泡沫,，不影響實(shí)驗(yàn)）

5、取出研磨管,，放入冷凍離心機(jī)中,，于4度，12000g離心10分鐘

6,、小心吸取上清液0.1ml至新的1.5研磨單位離心管中,，蓋上管蓋，在室溫上孵育15分種,，使樣品充分裂解至勻漿液較透明,，如果仍有少量顆粒屬于正常情況，不影響RNA提取質(zhì)量和得率,。

7,、在1.5研磨單位離心管中加入0.02ml氯仿，蓋緊管蓋,，振蕩混勻并將其在冰上孵育15分種,，于4度，12000g離心15分鐘,。離心后混合物分層：上清層,，中間層，下層,；RNA存在于上清層中,。

8、將上清層小心轉(zhuǎn)移到一干凈的離心管中,，加入等體積冰浴的異丙醇,，顛倒振蕩混勻，將混合的樣品在-20度條件,，孵育20分種,，于4度，12000g離心10分鐘,。RNA沉淀通常形成片狀沉淀附著于管壁或管底,。

小心棄去上清，用1ML的冰浴75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次,，顛倒洗滌離心管管壁,，并旋渦振蕩樣品，盡可能讓沉懸浮，于4度,，12000g離心5分鐘,，再次去除上清，晾干沉淀,。

10,、操作的后，在陰涼處適度干燥RNA沉淀（避免過分干燥,，那樣會(huì)降底它的可溶性）,。

11、用適量（一般可用0.01—0.02ml）的無RNA酶水或TE溶液來溶解RNA,。抽提好的RNA,，保存于-70度。