實驗步驟

1、首先將上海凈信的組織研磨機上的制冷模塊預先置于-20℃,，使用時取出安裝好,。將研磨珠去RNA酶處理。

2,、隨機抽取小鼠的尾巴100µg,，把樣本剪成盡可能小段，置于無RNA酶的2研磨單位離心管中（選擇耐液氮冷凍管子）,，同時加入1顆5號研磨珠和2顆3號研磨珠（如果選擇1.5研磨單位離心管,，只需要加入4-5顆3號研磨珠）。

3,、放置于液氮中一起浸泡3分鐘,，取出放置于預冷模塊中，在全自動樣品研磨儀上選擇13單位頻振研磨60s,。（該步驟可以根據(jù)研磨的細微程度要求可以再重復一遍）

4,、把研磨好的樣本加入0.06ml的PBS0.14ml的RNAiso Plus（此處選擇PBS，可以根據(jù)實驗需要加入其他提取液,，如1ml TRIzol等）,，繼續(xù)置于研磨機上選擇13單位頻振研磨60s,。樣本將處于糊狀。（其他提取試劑有可能會出現(xiàn)泡沫,，不影響實驗）

5,、取出研磨管，放入冷凍離心機中,，于4度,，12000g離心10分鐘

6、小心吸取上清液0.1ml至新的1.5研磨單位離心管中,，蓋上管蓋,，在室溫上孵育15分種，使樣品充分裂解至勻漿液較透明,，如果仍有少量顆粒屬于正常情況,，不影響RNA提取質(zhì)量和得率。

7,、在1.5研磨單位離心管中加入0.02ml氯仿,，蓋緊管蓋，振蕩混勻并將其在冰上孵育15分種,，于4度,，12000g離心15分鐘。離心后混合物分層：上清層,，中間層,，下層；RNA存在于上清層中,。

8,、將上清層小心轉(zhuǎn)移到一干凈的離心管中，加入等體積冰浴的異丙醇,，顛倒振蕩混勻,，將混合的樣品在-20度條件，孵育20分種,，于4度,，12000g離心10分鐘。RNA沉淀通常形成片狀沉淀附著于管壁或管底,。

小心棄去上清,，用1ML的冰浴75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次，顛倒洗滌離心管管壁,，并旋渦振蕩樣品,，盡可能讓沉懸浮，于4度,，12000g離心5分鐘,，再次去除上清,，晾干沉淀。

10,、操作的后,，在陰涼處適度干燥RNA沉淀（避免過分干燥，那樣會降底它的可溶性）,。

11,、用適量（一般可用0.01—0.02ml）的無RNA酶水或TE溶液來溶解RNA。抽提好的RNA,，保存于-70度,。